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薄層色譜法實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)大總結(jié)
發(fā)布時(shí)間:2022-11-18 09:04:04

別以為有了HPLC,薄層色譜(TLC)就過(guò)時(shí)了,USP、BP很多產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)還使用的是TLC。相比HPLC,TLC廉價(jià)、方便、易得。藥物合成領(lǐng)域,TLC的鋪板、點(diǎn)板、分析是每一個(gè)合成人員入門(mén)時(shí)必備的素質(zhì)。

概述


1. 藥典:薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上,在展開(kāi)容器內(nèi)用展開(kāi)劑展開(kāi),使供試品所含成分分離,所得色譜圖與事宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖對(duì)比,并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描,用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。

2. 如果你是做鑒別的話,薄層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測(cè)限和分離度;
3. 如果你是做含量測(cè)定,比如說(shuō)用薄層掃描法,薄層的系統(tǒng)適用性應(yīng)該做線性范圍、同板精密度、異板精密度、回收率;
4. 手工鋪制的板子,只適宜于定性分析,不宜于分離定量;
5. 化學(xué)藥一般是作有關(guān)物質(zhì),需要一定的載藥量,所以要適當(dāng)增加厚度;
6. 中藥一般較難分離,需要薄板,以增加分離度;
7. 手工鋪制的板子常用的有:硅膠G板和硅膠CMC-Na板。前者是煅石膏(石膏經(jīng)140℃烘烤3—4小時(shí))與硅膠按1—1.3:10混合均勻。每份硅膠G加水2—3份調(diào)成糊狀,即可使用。后者的操作各位大蝦已有論述。
8. 如果你鋪板目的是做分析用的話,肯定得很仔細(xì)用心;如果僅是天然藥化那種粗略檢查過(guò)柱子得到的餾分純度,那就沒(méi)有必要這么復(fù)雜了,也就是說(shuō)速度可以快點(diǎn),板的要求也沒(méi)有必要這么高;
9. 單純的手鋪板,技巧要求很高的,如果有鋪板器(也是完全手動(dòng)的那種),鋪出的板子基本上可以保證均一的。
10. 要噴硫酸乙醇并定量的最好鋪水板;鋪水板是最考技術(shù)的,主要是碾磨技術(shù),大家可以探討一下;
11. 硫酸乙醇顯色作定量分析的品種,但凡加了CMC-Na的板都易烘糊,尤其是溫度高于100度時(shí),后改用不加CMC輔的水板來(lái)作,就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象,故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺(jué)輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1:3.5左右,而且研磨后要盡快涂布,不能易于凝固而難于涂布。

展開(kāi)

12. 藥典:展開(kāi)容器 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸,并有嚴(yán)密的蓋子,底部應(yīng)平整光滑,或有雙槽。上行展開(kāi)一般可用適合薄層板大小的專(zhuān)用平底或雙槽展開(kāi)缸,展開(kāi)時(shí)須能密閉。水平展開(kāi)用專(zhuān)用的水平展開(kāi)缸。
13. 藥典:將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中,浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜(切勿將樣點(diǎn)侵入展開(kāi)劑中),密封頂蓋,待展開(kāi)至規(guī)定距離,除另有規(guī)定外,一般為8~15?。悖恚軇┣把剡_(dá)到規(guī)定的展距,取出薄層板,晾干,按正文項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。
14. 展開(kāi)劑的選擇(分離單體):
(1)粗分,也就是當(dāng)你的樣品極性范圍比較大的時(shí)候,可以直接采用極性較小的流動(dòng)相。然后將前沿、原點(diǎn)以及前沿及原點(diǎn)間的硅膠分別刮下,提取。這樣,樣品就被分為幾個(gè)部分,而各個(gè)部分的極性相差也比較小了。然后再將這幾部分分別進(jìn)行下面的細(xì)分TLC。
(2)細(xì)分。經(jīng)過(guò)粗分之后,我們一般對(duì)各個(gè)部分的極性都能夠做到心中有數(shù)了。比如,被沖到前沿的樣品,要采用更小極性強(qiáng)度的流動(dòng)相,而死吸附部分,則需要較大強(qiáng)度的流動(dòng)相。
我們?cè)诔醪酱_定了流動(dòng)相的極性強(qiáng)度之后,可以自己設(shè)計(jì)幾個(gè)溶劑系統(tǒng)。在選擇流動(dòng)相的組成的時(shí)候,可以參考snyder的溶劑分類(lèi),從質(zhì)子受體,質(zhì)子給體和偶極作用的溶劑中各選擇一種,然后再選擇一個(gè)強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑。當(dāng)然,也可以參考文獻(xiàn)中采用的流動(dòng)相。選好了要用的流動(dòng)相,就可以根據(jù)我們初步確定的極性強(qiáng)度得到流動(dòng)相的配比了(如果是二元流動(dòng)相的話)。如果是三元及以上的流動(dòng)相,可以采用Glajch和Youngstrom的七種溶劑系統(tǒng)的方案進(jìn)行選擇流動(dòng)相的配比。然后從中選擇分離效果比較好的組合。
最開(kāi)始可以采用微量圓環(huán)法(將樣品點(diǎn)在中間,然后將流動(dòng)相用毛細(xì)管從原點(diǎn)向圓周擴(kuò)散)和小板實(shí)驗(yàn)法來(lái)摸索,然后再應(yīng)用于大的制備TLC。
我也曾直接采用圓環(huán)法,也稱(chēng)為環(huán)形展開(kāi),來(lái)進(jìn)行制備的。本來(lái)是應(yīng)該有專(zhuān)門(mén)的U形展開(kāi)室來(lái)展開(kāi),但是因?yàn)槲覀冞@里沒(méi)有這個(gè)設(shè)備,所以我一般采用簡(jiǎn)易的方法:即將樣品點(diǎn)在中央,然后用尖頭的滴管源源不斷的向圓心滴加流動(dòng)相的。樣品會(huì)分出不同的同心圓而得到分離。這樣的好處有三:(1)只要操作小心,各個(gè)同心圓真的就非常圓,即不會(huì)出現(xiàn)線性層析中的邊緣效應(yīng)等。(2)分離效果更好,拖尾現(xiàn)象小于線性層析。(3)由于圓心式展開(kāi)的Rfc是線性展開(kāi)的Rf的平方根,要大于線性展開(kāi)的Rf,所以分的更開(kāi)。弊端在于將各個(gè)組分從板上刮下的時(shí)候需更小心才不會(huì)使之混雜。
15. 當(dāng)展開(kāi)劑極性差別很大時(shí),特別是極性大的成分所占比例很小時(shí),往往會(huì)出現(xiàn)溶劑脫混現(xiàn)象。在這種情況下,展開(kāi)槽 飽和與不飽和差別沒(méi)有顯著性差異,薄層板上往往會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似分層的現(xiàn)象,所以只有換展開(kāi)系統(tǒng)來(lái)調(diào)整。
16. 甲醇用量較小,而甲醇又易揮發(fā),容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng),要特別注意展開(kāi)劑的平衡和層析缸的密封。
17. 如果經(jīng)過(guò)一次展開(kāi)后,展開(kāi)槽內(nèi)仍剩下足夠的展開(kāi)劑,可以展開(kāi)第二塊板子嗎?
個(gè)人認(rèn)為最好不要。一般來(lái)說(shuō)為得到較好的分離效果,應(yīng)先飽和一下,第二次使用如果還要飽和就會(huì)造成另一側(cè)殘留的展開(kāi)劑附著在板子上,造成影響。而且有機(jī)溶劑一般較易揮發(fā)。
18. 自己手鋪的薄層板怎么都沒(méi)有買(mǎi)來(lái)的高效板好用,用過(guò)之后也可以用極性大些的展開(kāi)劑將展開(kāi)的點(diǎn),二次展開(kāi)跑過(guò),這樣就可以重復(fù)利用了。

顯色

19. 藥典:顯色裝置 噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出;浸漬顯色可用專(zhuān)用的玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替;蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。
20. 說(shuō)關(guān)于薄層板加熱變黑的問(wèn)題,其實(shí)很容易解決:當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了,可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了。我們實(shí)驗(yàn)室里一般都采用此法,簡(jiǎn)便、快潔.如果一非想使用烘箱烘的話,一定要用帶玻璃窗的,當(dāng)看到顯色了就取出,不然不好控制顯色時(shí)間,時(shí)間過(guò)長(zhǎng),CMC容易碳化變黑。
21. 根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),薄層版變黑與CMC-Na的濃度過(guò)大有關(guān),如果你留意的話,你會(huì)發(fā)現(xiàn),當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時(shí),加熱時(shí)間稍長(zhǎng)就會(huì)變黑(其他顯色劑是沒(méi)事的),我老師說(shuō)這是因?yàn)闈饬蛩岚眩茫停茫危崽炕耍鋵?shí)分子材料的溶解必然都會(huì)有一個(gè)溶脹,溶解的過(guò)程,所以配制的時(shí)候,應(yīng)該將稱(chēng)好的CMC-Na少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開(kāi)平鋪,這樣能夠充分浸潤(rùn),使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解;當(dāng)然如果你不是很急著用的話也完全可以,直接用水泡著放那,估計(jì)十天半月的也可以用了。
45.?。茫停茫危岬娜芙庑枰?????藥檢所的老師用一個(gè)大缸子裝水,按比例加入CMC-Na,讓他自然溶漲、溶解,臨用前用漏斗,加脫脂棉,濾過(guò)即可;
46. 根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),薄層版變黑與CMC-Na的濃度過(guò)大有關(guān),如果你留意的話,你會(huì)發(fā)現(xiàn),當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時(shí),加熱時(shí)間稍長(zhǎng)就會(huì)變黑(其他顯色劑是沒(méi)事的),我老師說(shuō)這是因?yàn)闈饬蛩岚眩茫停茫危崽炕?,其?shí)[color=blue=這種情況你只要適當(dāng)降低CMC-Na的濃度就可以了,當(dāng)然如果不加CMC-?。危岬脑捜菀装寻迮疲?br style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;"/>47.?。茫停茫危崛芤褐罅艘院蟛荒茉儆美渌畠?,否則,幾天以后就會(huì)變綠,起霉。
48.?。茫停茫危嵬耆芙夂?,用布氏漏斗過(guò)濾。

鋪板

49. 選擇合適的薄層板(如:20×10?。悖恚?,清潔干凈(先用洗手液或洗衣粉清洗,再用自來(lái)水沖洗干凈,接著用蘸有乙醇的棉花擦拭干凈,最后把板吹干或烘干),放置于清潔處,備用。
50. 玻璃板應(yīng)該很干凈,沒(méi)有劃痕,沒(méi)有缺口,4個(gè)角要“健全”。
51. 載板要求平滑清潔。在使用前一定要處理干凈,用洗滌液或肥皂水洗滌,再用水沖洗干凈,烘干。
52. 清洗玻璃板相當(dāng)重要,切記要清洗得相當(dāng)干凈,不然會(huì)在鋪板中產(chǎn)生小氣孔。
53. 薄層板最好用洗潔精浸泡1~2小時(shí),這樣比較容易清洗,清洗后薄層板依柱豎起,半小時(shí)即可晾干。
54. 板子一定要洗干凈,用適中濃度的鹽酸浸泡是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。
55. 板要絕對(duì)干凈。
總結(jié):完整、平滑、清潔!
56. 硅膠和粘合劑的比例不用固定,稀點(diǎn)鋪薄板,稠點(diǎn)鋪厚板,以目的決定比例。
57. 硅膠的研磨,當(dāng)然是一個(gè)方向了,可以適量的加入一定量的無(wú)水乙醇或丙酮來(lái)消泡,也可以適當(dāng)攪拌后放在干凈容器內(nèi)超聲,效果都是不錯(cuò)的。手工鋪硅膠的用量一般?。保啊粒玻啊。悖淼募s3~4克,硅膠和CMC-Na的用量一般是1:2.8~3,具體根據(jù)要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。
58.?。矗埃ス枘z:按CMC溶液的量、按40%的比例稱(chēng)取薄板層析硅膠,倒入大研缽中,與CMC溶液混合,充分研磨成均勻糊狀。
59. 先在研缽中加CMC溶液,再加硅膠,按同一方向研磨,這樣更容易調(diào)勻不易包埋硅膠顆粒;稠度以用研棒粘取,成連珠狀不成線狀下滴為好;配制時(shí)遵循現(xiàn)配現(xiàn)用、少量多次的原則,因其易干影響鋪制效果。
60. 硅膠和CMC-Na溶液的比例可以適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié),根據(jù)你所需要薄層板的軟硬來(lái)微調(diào)??梢砸粋€(gè)人研磨,一個(gè)人緩慢的倒CMC-Na溶液。研磨時(shí)最能考驗(yàn)?zāi)愕亩?,我覺(jué)得你該找女生來(lái)磨,但是那種太文弱的不行。研磨時(shí)要順著一個(gè)方向,速度不宜快,要順著研缽的邊緣,觀察仔細(xì),一定要把氣泡趕盡殺絕。研磨好的因改是均勻的,沒(méi)有氣泡,沒(méi)有固體的粉末類(lèi)異物,溶液有一定的粘性。
61. 硅膠的濃度要適中。太稀鋪板時(shí)易淌出,同時(shí)延長(zhǎng)板的干燥時(shí)間;太稠,流動(dòng)性不好,鋪板是靠其流動(dòng)性的,同時(shí)也很可能在沒(méi)鋪好前凝固。
62. 建議硅膠應(yīng)配制成偏稀的狀態(tài),這樣鋪制更容易,不必辛苦地顛好久,而且可多可少,可薄可厚。
63. 我的經(jīng)驗(yàn)是CMC-Na與硅膠配成 3:1比較合適,CMC-Na用千分之三到千分之五,硅膠濃度稍大一些或小一些也行,但不能太低,否則板子邊緣會(huì)凹凸不平。
64. CMC-Na:硅膠為2.5:1較好,樓上師兄說(shuō)的3:1應(yīng)該也可以,但是硅膠配的過(guò)稀時(shí)后果很?chē)?yán)重,板子在晾干時(shí)會(huì)出現(xiàn)許多裂縫,象萬(wàn)壽菊樣的開(kāi)花狀,完全不能用。
65. 充分磨好硅膠,后,再邊磨邊加CMC-Na溶液;鋪的時(shí)候,如果慢且多,那么有時(shí)會(huì)干了,你還要邊磨邊放點(diǎn)CMC-Na溶液。
66. 研磨時(shí)防止氣泡可以加少量的乙醇或者丙酮;加入幾滴乙醇或丁醇,可起到消泡的作用。
67. 加長(zhǎng)研磨的時(shí)間,勿太厚,避免板子炸裂。
68. 超聲的排氣效果很好。
69. 0.4%?。茫停茫危崛芤海ǎ保海常┲醚欣徶?,朝一個(gè)方向慢慢研細(xì)約10~15分鐘,10g吸附劑加入3滴95%乙醇以驅(qū)趕氣泡;
70. 硅膠的研磨時(shí)間:如果嚴(yán)格規(guī)定的話,需在一分鐘內(nèi)完成,從加入CMC溶液到吸附劑中至涂布結(jié)束,應(yīng)在四分鐘內(nèi)完成
71. 硅膠與CMC-Na溶液的比例根據(jù)硅膠型號(hào)的不同而不同:硅膠G或硅膠GF254比例一般為1:2 ~?。保海?,硅膠H或硅膠HF254比例一般為1:3 ~?。保海?。
72. 研磨的時(shí)候確實(shí)需要沿一個(gè)方向研,不要敷衍
73. 硅膠研磨要充分,防止氣泡。
74. 實(shí)在怕有氣泡,可以超聲一下。
75. 藥典:薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水(或加有黏合劑的水溶液)在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2~0.3 mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺(tái)上于室溫下晾干,后在110℃ 烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過(guò)透射光和反射光檢視)。表面應(yīng)均勻,平整,無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染。
76. 薄層板的厚度:如果定性分析,一般厚度以0.25?。恚頌楹?;如果要分離制備少量的純物質(zhì)時(shí),厚度應(yīng)稍大一些,常用的為0.5?。恚恚埃罚怠。恚?,甚至有1?。恚恚病。恚淼?。
77. 鋪板,我覺(jué)得是各人各喜歡,可以順著板中間倒,也可以順著某個(gè)邊緣倒,倒時(shí)也要注意不能引入小氣泡??梢杂貌AО粢芤浩戒佋诓AО迳?,如有需要,可以雙手10個(gè)指頭拖住玻璃板,有節(jié)奏的顛,使得硅膠分?jǐn)倓蚍Q(chēng)。尤其是4個(gè)角,容易高出玻璃板其他部位,所以要格外注意。顛好的板,表面看上去要光滑平整,沒(méi)有氣孔。
78. 將薄層用硅膠粉稱(chēng)定加入3倍量的CMC-Na溶液,研磨均勻(勻速一個(gè)方向)成糊狀(我用1分鐘左右),不要靜置迅速將涂料倒于備好的玻璃板(事先清洗干凈,不可有污漬、水滴。)自上而下自然流注鋪于玻璃板,倒量為距離邊緣3厘米左右即可(鋪厚板用量適當(dāng)多些,薄板量少些),然后用研缽棒涂布玻璃板上。顛板(上下左右或傾斜根據(jù)板的涂布情況而定)。鋪好的板要選擇一個(gè)水平、通風(fēng)的平臺(tái)放置,不可落上灰塵。
79. 依據(jù)薄層板使用需要,將適量研好的吸附劑倒到薄層板上,先用小錘將吸附劑蕩勻,傾斜層析板,使吸附劑流至層析板一側(cè),待吸附劑蓄積一定量后,再反向傾斜層析板,使吸附劑回流;然后是另外兩個(gè)方向,重復(fù)上述操作,后輕顛幾下薄層板即可。
80. 將吸附劑制備好后,直接將適量?jī)A倒于玻板的中央處,接著用研棒輕輕將吸附劑溶液向四周攤勻,然后開(kāi)始顛玻板;顛的時(shí)候可要注意啦:一定要輕輕的顛,從玻板的一頭顛到另一頭,然后反過(guò)來(lái)進(jìn)行。重復(fù)幾次即可。
81. 將研好的糊糊倒在干凈的板上,我一般是從中間一次性倒下去,然后用左手托板,輕輕傾斜,使糊糊向板邊緣流動(dòng),右手拿研棒將沒(méi)鋪到的地方涂均勻,但要注意研棒在接觸糊糊一直到最后涂抹均勻才能離開(kāi)板,一旦提起就不能再去涂抹,否則會(huì)留下痕跡。涂抹結(jié)束后,就顛板啦,我的經(jīng)驗(yàn)是顛的幅度不易大,但頻率可以快些。
82. 顛板。此過(guò)程要與前面步驟連續(xù)進(jìn)行,且不宜久顛,以保證顛好后硅膠還有一定的流動(dòng)性,放置到平臺(tái)時(shí)仍可以靠自身流動(dòng)修正顛板及移動(dòng)所產(chǎn)生的不均。
83. 將載玻片置于平臺(tái)上,用藥匙舀取糊狀硅膠,均勻地鋪在載玻片表面。
84. 鋪板時(shí),用的硅膠量要掌握好。
85. 將硅膠倒入在盛有CMC-Na溶液的研缽中,CMC-Na溶液的濃度不宜過(guò)高,研磨均勻,大約5-10分鐘,用研棒粘取,成珠滴為好,鋪板,兩面顛簸至平放置平臺(tái)上。
86. 載玻片的涂布:將干燥后的載玻片兩片夾在一起,沉浸入糊狀物中,使在載玻片上形成固體層.為了浸蕉一對(duì)載玻片,用你的指間夾住載玻片的一端,并盡可能地向下進(jìn)入所提供的糊狀物中.當(dāng)載波片一浸入糊狀物中后,立即以快而平穩(wěn)的速度將其拉出,并讓過(guò)量的糊狀物滴回.小心的分開(kāi)載玻片,放到水平臺(tái)上,干燥.(注意:糊狀物一定要均勻;要迅速拉出載玻片,大多數(shù)人拉得太慢)
87. 研磨硅膠時(shí),我一般取30?。绻枘zH,加入5%的CMC-Na 100?。恚?,研磨,當(dāng)將研棒提起時(shí),硅膠象成溜似的滴下為正好。
88. 鋪完板后,最好將兩邊的邊緣修理一下,并且各個(gè)邊緣都要擦干凈,這樣可以避免跑歪。
89. 邊緣壞一點(diǎn)可以用刀子刮去整齊的一條。
90. 對(duì)鋪好的板要選擇平整的地方,自然干燥,不易人為強(qiáng)制干燥。干燥后再活化,否則板會(huì)開(kāi)裂。
91. 鋪好的板,要找個(gè)干凈的地方放置晾干,這個(gè)過(guò)程也是耐心的等著它,請(qǐng)勿打擾。
92. 板鋪好后,自然涼干最好,一定是要從玻板后看也是干的,注意一定要放平,最好控制空氣流動(dòng)。
93. 板子鋪好之后一定要放在平面上陰干(一定是陰干,不然你會(huì)后悔的),如果看熒光最好是找一個(gè)比較干凈的房間,不然熒光下板子上會(huì)有很多點(diǎn)點(diǎn)。
94. 要等陰干且透后才能放入烘箱干燥活化時(shí)。還有一點(diǎn),鋪板和涼板時(shí)周?chē)沫h(huán)境要好,桌面要干凈,最怕是有粉塵,如有粉塵落在未干的板上可就慘了,定量不行,可以定性,但不好看。
95. 自然干燥后,放入烘干箱烘12小時(shí)以上。
96. 薄層板鋪好后一定要放置在平的臺(tái)面上,否則難保證板面硅膠的厚度均勻。
97. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開(kāi)鼓風(fēng)干燥30分鐘,再升溫干燥至干,注意升溫過(guò)快在使用的過(guò)程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象,不利于分離,以上方法經(jīng)本人兩年多的實(shí)踐,效果較好且耗時(shí)又不太長(zhǎng)。
98. 置平整處過(guò)夜自然晾干;如使用較急亦可60℃烘干。

活化

99. 活化的目的是除去水分。
100. 自然晾干后,活化一下(105攝氏度40分鐘左右),置于密封的干燥器保存。
101. 再在105~110℃活化,活化時(shí)間為0.5~1小時(shí),冷卻后即可使用。
102. 厚板在活化時(shí)容易裂,考慮到化學(xué)藥相對(duì)容易分離,所以降低活化溫度,自然晾干后,40或60攝氏度的烘箱中2~3小時(shí)即可,干燥器中保存。
103. 用于分離中藥的薄板需要活化,活化后要立即使用,可以稱(chēng)熱點(diǎn)樣飽和,不然空氣中的水分會(huì)導(dǎo)致你作無(wú)用功,使得吸附色譜轉(zhuǎn)為分配色譜。
104. 薄層烘干的時(shí)候最好不要在帶鼓風(fēng)的烘箱中烘,容易起皺,或者破裂。

點(diǎn)樣

105. 藥典:點(diǎn)樣器 一般采用微升毛細(xì)管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材。
106. 藥典:除另有規(guī)定外,在潔凈干燥的環(huán)境中,用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀,點(diǎn)樣基線距的底邊15~20?。恚?,高效板一般基線距底邊?。浮保啊。恚?,圓點(diǎn)狀直徑一般不大于3 mm,高效板一般不大于2 mm;條帶狀寬度一般為5~10 mm。高效板條帶寬度一般為4~8?。恚恚捎脤?zhuān)用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。一般不少于8 mm,高效板供試品間隔不少于5 mm。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層板表面。
107. 點(diǎn)樣,可以用進(jìn)樣器,也可以用定量毛細(xì)管(有點(diǎn)貴啊,5ul的2塊多一根),點(diǎn)樣時(shí)盡量使點(diǎn)小且圓整,盡量不要破壞板子。
108. 毛細(xì)管點(diǎn)樣,點(diǎn)樣量不能控制。你可以到藥店買(mǎi)1~2ml的注射器作為點(diǎn)樣器,可以滿足TLC鑒別的要求,而且很便宜哦!
109. 點(diǎn)樣,我上學(xué)的時(shí)候,老師用比較便宜的進(jìn)樣器(大約10幾塊錢(qián)吧,10μl即可),將針尖打磨圓滑,老師好像是用銼一點(diǎn)一點(diǎn)銼的,這樣點(diǎn)樣的時(shí)候樣品溶液不容易沿針尖上行(甲醇溶液都這樣),并且針尖不會(huì)刺破已經(jīng)鋪好的薄層板?,F(xiàn)在,我和師兄都是實(shí)行的這個(gè)辦法,還是比較實(shí)用的,點(diǎn)樣量可以精確到 0.5?l。當(dāng)然,點(diǎn)樣的時(shí)候手不能抖動(dòng),動(dòng)作要輕
110. 要磨平微量進(jìn)樣器的針尖,簡(jiǎn)單的方法就是,在展缸的蓋子上輕磨(當(dāng)然是靠近中間部分),就很快能解決問(wèn)題 ,且很平滑。
111. 關(guān)于點(diǎn)樣:我們一直都用液相平頭進(jìn)樣針,10 ul就夠了,如果點(diǎn)樣量低于1ul的話,就用氣相進(jìn)樣針。都可以很好的控制點(diǎn)樣量,且斑點(diǎn)也可以滿足要求。速度也快??梢员苊饷?xì)管先快后慢的毛病。
112. 用定容毛細(xì)點(diǎn)樣管:5?。酰臁。病。酰欤薄。酰臁?br style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;"/>113. 對(duì)于點(diǎn)樣我也有些心得。原來(lái)有專(zhuān)門(mén)的點(diǎn)樣管,是10?。酰煲?guī)格的,是點(diǎn)10 ul的好說(shuō),反正點(diǎn)完就是了,但要點(diǎn)5ul或更少,那就全憑眼力了,做得是一點(diǎn)把握沒(méi)有啊,但還得點(diǎn),呵呵。自從發(fā)現(xiàn)可以用微量進(jìn)樣器后,不僅可以控制的得心應(yīng)手,不會(huì)因?yàn)橐话床环€(wěn)把藥液給全點(diǎn)上去導(dǎo)致斑點(diǎn)過(guò)大,還可以重復(fù)利用節(jié)省開(kāi)支,重要的是還環(huán)保。呵呵!提倡廣大的兄弟姐妹也用微量進(jìn)樣器替代塑料的點(diǎn)樣管,經(jīng)濟(jì)又好用。

平衡與飽和

114. 藥典:展開(kāi)前如需要溶劑蒸氣預(yù)預(yù)平衡,可在展開(kāi)缸中加入適量的展開(kāi)劑,密閉,一般保持15~30分鐘,溶劑蒸氣預(yù)平衡后,應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板,立即密閉,展開(kāi)。如需使展開(kāi)缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài),則須在展開(kāi)缸的內(nèi)側(cè)壁上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開(kāi)劑中,密封頂蓋,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。
115. 飽和也非常重要,邊緣效應(yīng)很?chē)?yán)重的不妨用下端浸在展開(kāi)劑中的濾紙貼在展開(kāi)缸的內(nèi)壁,這樣飽和效果會(huì)好一些。
116. 在層析缸口涂適量凡士林,增加密封性。
117. 層析缸在展開(kāi)前最好平衡一個(gè)小時(shí)左右,讓里面的展開(kāi)劑平衡。也可以在兩邊放濾紙條,增加展開(kāi)劑的散發(fā)面積,減少邊緣效應(yīng)。
118. 以展開(kāi)劑邊緣效應(yīng)的大小,確定展開(kāi)劑平衡時(shí)間的長(zhǎng)短,一般平衡時(shí)間在30分鐘即可。


(文章來(lái)源于互聯(lián)網(wǎng))

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